РНК вируса гепатита A, качественное определение

Вирус гепатита С - это РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, рода Hepacivirus.

Гепатит С - антропонозная инфекция. Природный резервуар HCV не установлен. Источником инфекции являются больные острым и хроническим гепатитом С, главным образом, особы с бессимптомным течением болезни (они составляют 60 – 70 %), у которых гепатит С не диагностируется. Механизм передачи HCV - парентеральный (искусственный и естественный). Искусственный парентеральный механизм передачи имеет место при всех инвазивных процедурах медицинского и немедицинского характера. Естественные пути передачи вируса гепатита С зарегистрированы, но не играют такой существенной роли как при заражениях гепатитом В (описаны случаи внутрисемейного распространения, когда заражение происходило при использовании общих зубных щеток, лезвий для бритья и др.). Риск половой передачи вируса небольшой и составляет 3 - 6 %. Перинатальная передача вируса HCV, как и HBV, возможна, но встречается редко и имеет место у 5,7% детей, рожденных матерями-носителями (при высокой вирусемии или в случае если мать ВИЧ-инфицированна).

По данным ВОЗ 3% населения в мире инфицированы вирусом гепатита С (ВГС). Особенностью ВГС-инфекции является высокая частота хронизации (до 85%), часто бессимптомное течение заболевания с труднопредсказуемым исходом. Тяжелыми последствиями хронического гепатита С могут быть цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома. Возможны внепеченочные проявления HCV-инфекции.

Патогенез гепатита С недостаточно изучен. Харакетрной особенностью HCV-инфекции является то, что у 20% случаев она протекает как острый гепатит, у 70-80 %, как хронический гепатит. С HCV-инфекцией связывают 40% цирроза печени в терминальной стадии и 60% случаев гепатоцеллюлярной карциномы. Попав непосредственно в кровь, вирус проникает в гепатоцит, который и стает его главным местом репликации. У больных ВГС вирусный антиген постоянно выявляется в цитоплазмме гепатоцитов. Кроме гепатоцитов, HCV может поражать мононуклеары крови, где также возможна его репликация. HCV постоянно присутствует в крови больного человека. Орпеделено три разновидности вирусемии. Транзиторная вирусемия имеет место при остром течении ВГС с выздоровлением, непродолжительная – с дальнейшей элименацией вируса из организма. Персистирующая вирусемия наблюдается во всех случаях хронического ВГС и продолжается на протяжении всего времени болезни. Повторная вирусемия наблюдается у больных в начале заболевания с дальнейшим исчезновением вируса из крови, а потом через несколько месяцев в крови больного снова выявляется РНК HCV. Инфицирование HCV гепатоцита не приводит к интеграции его генома в геном клетки, как это имеет место при HBV-инфекции. До сих пор не решен вопрос о механизме разрушения гепатоцитов при HCV. Одни исследователи считают, что HCV вызывает цитопатическое действие гепатоцита, другие связывают разрушение гепатоцитов со специфическим и неспецифическим иммунным ответом организма. Исследования последних лет выявили присутствие в печени вирусспецифичных Т-лимфоцитов, высокого уровня виррусемии и развитие молниеносной формы гепатита на фоне иммуносупрессивной терапии Naoumov N.V. et al, 1999 считают, что Т-клеточный иммунитет является основным фактором, который влияет на клиническое течение и дальнейшие последствия HCV-инфекции. Не исключено, что оба механизма разрушения гепатоцитов может действовать одновременно или с преобладанием того или другого на разных стадиях инфекционного процесса.

Важное место в продолжительной персистенции HCV в организме пренадлежит высокой генетической изменчивости вируса, что и обеспечивает ускользание от негативного влияния иммуной системы.

Учитывая неуклонный рост заболеваемости вирусным гепатитом С, проблема этиологической диагностики этого заболевания становится все более актуальной. Сегодня наиболее распространенным методом диагностики вирусного гепатита С является иммуноферментный анализ (ИФА), направленный на выявление специфических антител в сыворотке крови. Однако, даже при использовании тест-систем 3-го поколения, считающихся наиболее чувствительными и специфичными, не всегда удается своевременно поставить диагноз. Это обусловлено существованием так называемого «серологического окна» - периода между моментом инфицирования и появлением специфических антител. Этот период может длиться от 2 недель до 6 месяцев. Кроме того, наличие антител к вирусу гепатита С не свидетельствует о наличии заболевания. Одним из основных маркеров активности патологического процесса является репликация вируса, для доказательства которой необходимо выявление самого вируса или его компонентов.

Метод полимеразной цепной реакции, позволяющий специфично выявлять нуклеиновые кислоты микроорганизмов, является одним из наиболее эффективных методов детекции репликации ВГС.

Использование тест-систем для выявления РНК-HCV на основе ПЦР позволяет выявлять инфекцию на самом раннем периоде заболевания (РНК-HCV обнаруживается в сыворотке крови уже в течение первой недели после инфицирования). Качественный ПЦР-анализ на РНК ВГС необходим также для мониторинга противовирусной терапии, так как исчезновение вирусной РНК в процессе лечения является одним из критериев его эффективности.

Определение концентрации РНК (вирусной нагрузки) необходимо для выбора схемы противовирусной терапии, прогноза и мониторинга ее эффективности. Высокие показатели вирусной нагрузки (более 2 000 000 копий РНК/мл или приблизительно 500 000 МЕ/мл) являются показателем неблагоприятного прогноза в отношении эффективности терапии. Поэтому пациентам с высокой вирусной нагрузкой рекомендуется назначение более агрессивного и продолжительного курса терапии. Через немколько недель после начала противовирусной терапии можно прогнозировать исход лечения. Согласно рекомендациям консенсусной конференции 2002 года необходимо оценивать ранний вирусологический ответ путем измерения вирусной нагрузки до начала лечения и через 12 недель после начала лечения.

Качественное определение РНК вируса гепатита С методом ПЦР.

Аналитические показатели: выявление РНК вируса гепатита С методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в плазме крови.

Определяемый фрагмент - консерва­тивный участок генома вируса гепатита С.

Специфичность определения - 98%. Чувствительность определения - не менее 50 вирусных частиц в 5 мкл прошедшей обработку (выделение РНК вируса и процесс перевода в ДНК) пробы. По рекомен­дации ВОЗ установление диагноза гепатита С возможно на основании троекратного обнаружения HCV РНК в сыворотке крови больного при отсутствии других маркеров гепатита. В острую фазу гепатита РНК вируса выявляется в крови уже через 1-2 не­дели после заражения, то есть задолго до появления антител к вирусу гепатита С.

Показания к назначению анализа:

• Клинические признаки гепатита.

• Профилакти­ческие скрининговые исследования (РНК вируса гепатита С - самый ранний маркер при острой инфекции).

• Обследования контактных лиц.

• Диагностика гепатитов сме­шанной этиологии - выявление ведущего вируса.

• Выявление стадии активной реп­ликации вируса при хроническом состоянии.

• Контроль проводимой терапии.

• Цир­роз печени.

Печень.

Взятие крови желательно производить натощак.

Венозная кровь (с ЭДТА).

Хранение материала: не более 24 часов при +4°С.

3 рабочих дня.

Вирусолог.

Инфекционист.

Гепатолог.