Исследование влияния внутриглазной жидкости и сыворотки крови больных закрытоугольной глаукомой на иммунный статус в эксперименте

Набиев А.М.

Study of influence of intraocular fluid and blood serum of patients with angle–closed glaucoma on the immune status in experiment

A.M. Nabiev

Second Clinic of Tashkent Medical Academy

Purpose: Study of possible direct influence of intraocular fluid (IOF) and blood serum of patients with severe stage of angle–closed glaucoma (ACG) on immunocytes receptors.

Materials and methods: We analyzed results of the study in vitro of influence of the intraocular fluid and blood serum on immunocytes of 20 patients (20 eyes) with severe stage of ACG. 100 microliters of IOF and blood serum were added to dredge of lymphocytes of patient with ACG. After this lymphocytes were incubated and quantity of T–lymphocytes, B–lymphocytes, T–helpers, T–suppressors and EK–cells in reaction of rosetting was detected with the help of monoclonal antibodies.

Results: Rosetting abilities of lymphocytes are changed by 30 minutes contact with IOF. The most sensitive population to IOF immune suppression turned out to be T–suppressors. T–helpers and EK–cells were in fewer deficits.

Conclusion: IOF and blood serum of the patient with AGC contain immune suppressive highly active agents, which are able to depress rosetting process sharply and totally influence all types of immunocytes, especially T–suppressors, T–helpers and EK–cells.

В экспериментальных исследованиях было установлено, что наиболее выраженным токсическим эффектом на иммуногенез обладает внутриглазная жидкость (ВГЖ) больных с далеко–зашедшей стадией первичной глаукомы [1,2,3,4].

Цель исследования – изучение возможности влияния ВГЖ и сыворотки крови больных с далекозашедшей стадией ЗУГ на рецепторный аппарат иммуноцитов при непосредственном их контакте.

Материал и методы. В работе обобщены результаты исследования влияния ВГЖ и сыворотки крови 20 больных (20 глаз) с далекозашедшей стадией ЗУГ на иммуноциты в системе in vitro. Возраст больных (8 мужчин, 12 женщин) составил 62–77 лет (средний – 65,1±5,9 года). Сроки наблюдения – от 6 мес. до 3 лет.

Лимфоциты (мишени) выделяли из периферической крови указанных больных и по методике Bounm (1974). Взвесь лимфоцитов от каждого больного наливали в 4 пробирки, в одну из которых добавляли 100 мкл ВГЖ, в другую 100 мкл сыворотки крови больного. После добавления лимфоциты инкубировали в течение 30 минут при +37°С. Контролем служили суспензии лимфоцитов, к которым не добавляли ВГЖ и сыворотку крови. Затем с помощью моноклональных антител (производства Института иммунологии МЗ РФ, Москва) определяли количество Т–лимфоцитов, В–лимфоцитов, Т–хелперов, Т–супрессоров и ЕК–клеток в реакции розеткообразования.

Результаты и обсуждение. У больных с глаукомой происходят сдвиги в Т– и В–звеньях иммунитета. Количество Т–лимфоцитов снижается в 1,46 раза по сравнению с контролем и составляет 43,5±0,7%. Существенное снижение установлено и в популяции Т–супрессоров, уровень которых составил 9,0±0,4%, что в 1,59 раза ниже нормативных значений. Что касается ЕК–клеток, то их уровень уменьшился в 1,5 раза (13,8±0,6% – контроль, 9,2±0,6% – больные).

Противоположные изменения обнаружены в В–звене иммунитета. В отличие от Т–системы уровень В–лимфоцитов достоверно повысился в 1,26 раза и составил 26,8±0,6%.

Полученные данные свидетельствуют о формировании при глаукоме дисбаланса в иммунном статусе, выражающегося в угнетении Т–звена и активации В–звена иммунитета.

ВГЖ больных далекозашедшей стадией глаукомы in vitro инкубировали с лимфоцитами периферической крови больных ЗУГ. Установлено, что 30–минутный контакт ВГЖ с лимфоцитами изменяет их розеткообразующие свойства. Так, число Т–лимфоцитов составляет 37,8±0,7%, что достоверно ниже, чем в образце без ВГЖ.

Уровень Т–хелперов снижался в 1,25 раза (p<0,05). Более выраженное угнетение установлено в популяции Т–супрессоров. Если до инкубации их число составило 9,0±0,4%, то после обработки ВГЖ данный показатель уменьшился в 1,34 раза (6,7±0,4%). Хотя уровень ЕК–клеток снизился до 7,4±0,6%, но разница с данными до инкубации была недостоверной.

Выше говорилось, что при глаукоме наблюдается повышение уровня В–лимфоцитов. Оказалось, что ВГЖ способствует утрате В–клетками розеткообразующих свойств. Так, их число достоверно снижалось до 22,7±0,5%, что в 1,18 раза ниже значений, полученных в образце без ВГЖ.

Следует также отметить различную чувствительность иммуноцитов к супрессивному эффекту ВГЖ. Наиболее чувствительной к иммуносупрессантам ВГЖ оказалась популяция Т–супрессоров. В меньшей степени наблюдался дефицит по Т–хелперам и ЕК–клеткам (в 1,25 и 1,24 раза, соответственно). Затем следует дефицит популяций В–лимфоцитов (в 1,18 раза) и Т–лимфоцитов (в 1,15 раза).

Количество Т–лимфоцитов в пробе без сыворотки составляет 44,5±0,9%, а после инкубации с сывороткой крови больного – 40,0±0,9%, т.е. разница между показателями достоверно снижается в 1,11 раза.

Несколько большее угнетение выявлено в популяции Т–хелперов. Инкубирование данной популяции лимфоцитов с сывороткой крови больного глаукомой снизило их уровень до 14,0±0,6%, т.е. в 1,19 раза (p<0,05).

Достоверное снижение (в 1,11 раза) обнаружено по В–лимфоцитам. Если до инкубирования с сывороткой крови больного с глаукомой их уровень равнялся 27,1±0,5%, то после инкубирования – 24,2±0,5%. Существенных изменений в содержании Т–супрессоров и ЕК–клеток после инкубирования не обнаружено (p>0,05).

Таким образом, ВГЖ больных с далекозашедшей стадией ЗУГ содержит токсические вещества, оказывающие супрессивное воздействие на функции иммунокомпетентных клеток. Непосредственный контакт ВГЖ с иммуноцитами больных с глаукомой, у которых в процессе болезни формируется дисбаланс в иммунологических показателях (снижение Т–звена и повышение В–звена иммунитета) вызывает еще большее угнетение всех субпопуляций Т–лимфоцитов и В–клеток. Вероятно, источниками этих веществ являются зоны поражения тканей глазного яблока при глаукоме. К ним относятся зрительный нерв, радужная оболочка, цилиарное тело, трабекулярная ткань.

Снижение иммунного статуса (Т–звена) у больных с глаукомой можно, очевидно, объяснить негативным воздействием различных продуктов, поступающих в кровь из патологического очага и нарушающих функции разных типов лимфоцитов при непосредственном контакте или через медиаторы и гуморальные факторы иммунитета. Активация В–звена иммунитета при глаукоме, вероятно, является ответной реакцией организма на патологические процессы, при которых идет деструкция различных тканей, что требует утилизации из организма продуктов распада иммуноглобулинами. Возможно, в формировании дисбаланса иммунитета при глаукоме играют роль нарушения иммуно–нейроэндокринного характера, поскольку все эти системы между собой тесно взаимосвязаны.

В сыворотке крови больных с далекозашедшей стадией ЗУГ также содержатся токсические вещества, оказывающие супрессивное воздействие на некоторые популяции иммунокомпетентных клеток. Точками приложений для этих веществ являются Т–лимфоциты, В–лимфоциты и Т–хелперы. Функция Т–супрессоров и ЕК–клеток не изменяется.

Сравнение с вышеописанными данными свидетельствует о том, что в ВГЖ больных содержатся более активные иммуносупрессивные факторы, чем в сыворотке крови. Очевидно, это связано с более высокой концентрацией иммуноактивных веществ в ВГЖ по сравнению с сывороткой крови. С другой стороны, в крови, вероятно, содержатся низкомолекулярные вещества, снижающие активность иммуносупрессивных факторов.

Выводы

1. В ВГЖ и сыворотке крови больных ЗУГ содержатся иммуносупрессивные вещества с высокой активностью, способные даже при кратковременном контакте с лимфоцитами резко угнетать одну из их функций, а именно – способность взаимодействовать с эритроцитами, с комплексированными моноклональными антителами, т.е. процесс розеткообразования.

2. ВГЖ и сыворотка крови больных с далекозашедшей ЗУГ оказывает тотальное действие на все типы иммуноцитов, но в большей степени поражает функции важнейших регуляторных субпопуляций: Т–супрессоры, Т–хелперы и ЕК–клетки. Общее количество В–лимфоцитов и Т–лимфоцитов угнетается в меньшей степени.

Литература

1. Курышева Н.И., Винецкая М.И., Еричев В.П. Роль свободно радикальных реакции камерной влаги в развитии первичной открытоугольной глаукомы. // Вестн. офтальмологии. – 1996.–№ 4.–С.3–5.

2. Gronston J.G., Chang L.H., Daniels J.T. et all. T lymphocyte mediated lysis of mitomycin C treated Tenon”s capsule fibroblasts //Br. J. Ophthalmology. – 2004. Vol.88. – № 5. – P.399–405.

3. Hong Y., Yun Y., Lee Y. Chemical analysis of aqueous humor in patients with cataracts and glaucoma. // J. Glaucoma.–1994.–Vol. 16. – № 1.–P.18 – 24.

4. Marshall G. Antioxidant enzymes in the human iris: an immunology stady // Br. J. of Ophthalmology. – 1997. – Vol. 81. – № 4. – P. 314 – 318.